紫外可見分光光度計中準確的高吸光度測量

　　紫外可見分光光度計通過比較穿過樣品的光束強度與(yu) 未放置樣品的參考光束的強度來提供定量測量。樣品的濃度越高，它吸收的光就越多，因此高濃度測量對應於(yu) 高吸光度值。然而，在高吸光度下，實際上很少有光到達儀(yi) 器檢測器，對於(yu) 許多市售的不同分光光度計來說，對這些非常低的信號水平進行準確的線性測量是非常具有挑戰性的。如果極低光照水平的測量不是線性的，那麽(me) 儀(yi) 器的高吸光度值測量將不準確，不能用於(yu) 可靠的定量測量。

　　吸光度和線性

　　根據 Beer-Lambert 定律，吸光度 (Abs) 是樣品濃度的線性函數。盡管分光光度計實際上測量的是光的透射率。對於(yu) 隻有非常少量的光到達檢測器的高吸光度測量，任何影響這些低水平測量的儀(yi) 器效應都會(hui) 對測量的線性度產(chan) 生重大影響。雖然大多數分光光度計指定的可測量吸光度範圍在 0 - 4 Abs 之間，但儀(yi) 器光學器件的質量決(jue) 定了低光水平下的實際性能。最重要的考慮因素是雜散光和噪聲的貢獻。

　　雜散光

　　雜散光是從(cong) 單色儀(yi) 到達檢測器的任何不直接來自測量光束的光，它會(hui) 影響測量的透射光，如下所示：

　　中檔儀(yi) 器的典型雜散光係數約為(wei) 0.05%T，而高端儀(yi) 器在單色儀(yi) 版本中的雜散光貢獻率約為(wei) 0.015%T。然而，具有兩(liang) 個(ge) 單色器的研究級儀(yi) 器可提供最佳的線性吸光度範圍，雜散光低至 0.00025%T。

　　對於(yu) 中檔儀(yi) 器，在 3 Abs 範圍內(nei) 由雜散光引起的誤差非常顯著，並且在 4 Abs 時要高得多，這意味著定量測量應限製在 2 Abs 及以下。對於(yu) 單色儀(yi) 儀(yi) 器，3 Abs 處的誤差更小，這意味著它可以用於(yu) 直到該點的定量測量，但不能達到 4 Abs。然而，在雙單色器版本中，誤差可以忽略不計，直至 4 Abs。

　　噪音

　　信噪比對於(yu) 確定分光光度計的靈敏度至關(guan) 重要。檢測係統內(nei) 的峰間噪聲會(hui) 影響非常小信號水平的測量精度，即高吸光度。係統的光學設計越好，能量吞吐量就越好，這反過來又可以提供非常低的噪聲測量。噪聲被引用為(wei) 峰峰值或 RMS 值。RMS 對峰峰值有平滑作用，給出明顯更低的噪聲值。然而，直接影響低信號電平測量的是峰間噪聲，因此峰間噪聲是應始終考慮的值。噪聲值的典型示例是零吸光度時的 0.0003A 峰間值，但對於(yu) 頂級儀(yi) 器，噪聲測量值為(wei) 0。